В экспозиции представлено около 250 произведений украинского и русского искусства XVI - XVIII веков.
В постоянной экспозиции музея представлены русские и украинские иконы XVI - XVIII веков, произведения таких выдающихся мастеров, как Д. Левицкий, В. Боровиковский, В. Тропинин, О. Кипренского, Т. Шевченко, И. Айвазовского, И. Шишкина, В. Васнецова, С. Васильковского, В. Сурикова, П. Левченко, М. Нестерова и многих других.
Отдельный зал посвящён творчеству нашего великого земляка И. Репина, центральное место в котором отведено известному полотну «Запорожцы пишут письмо турецкому султану».